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menghuan41:2010-2011年度春夏季学期微生物学参考答案及评分原则

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2010-2011 年度春夏季学期微生物学参考答案及评分原则
一、填空题(总分 18 分,每空 1 分)
1、EMP(或糖酵解) HM(或单磷酸己糖,或磷酸戊糖) ED, 磷酸解酮酶(或“PK , , 和 HK” ) 2、同型, 异型, 双歧 3、葡聚糖(或葡聚糖、甘露聚糖、蛋白质、几丁质及少量脂质) 4、对数 5、消毒 6、乙醇, 甘油 7、真菌 8、休眠 9、操纵子 10、Ames 11、溶源化 12、5-溴尿嘧啶(或 5-BU)

二、判断题(总分 12 分,每题 1 分)
1、√ 2、× 3、√ 4、× 5、√ 6、× 7、√ 8、× 9、√ 10、√ 11、√ 12、×

三、简答题(总分 48 分,每题 8 分)
1、 答: 次级代谢与初级代谢的关系密切, 初级代谢的关键中间产物往往是次级代谢的前体。 初级代谢是基础,菌体生长到对数后期及稳定期才能进行次级代谢,合成一些对微生物 生命活动无明确功能的物质。 分) (2 次级代谢的调节: (1) 初级代谢对次级代谢的调节。由于次级代谢一般以初级代谢产物为前体,因此 次级代谢必然受到初级代谢的调节。 分) (2 (2) 碳、氮代谢物的调节作用。菌体在对数生长期阶段,碳源的分解物阻遏了次级 代谢酶系的合成,只有碳源被消耗完之后,解除阻遏作用,次级代谢物才能得 以合成。NH4+、硝酸盐等氮源的浓度往往影响抗生素的合成。 分) (2 (3) 诱导作用及产物的反馈抑制。 分) (2 2、 答: 革兰氏阳性菌细胞壁厚度大, 层次少, 化学组分简单, 一般只含有 90%肽聚糖和 10% 磷壁酸。 分) (4 细胞壁的结构层次:由外到内的顺序是肽聚糖、磷壁酸、周质空间。 分) (2 其中肽聚糖是由双糖单位、四肽尾和肽桥构成; 分)磷壁酸的主要成分为甘油磷酸 (1 或核糖醇磷酸,分为内嵌于肽聚糖层内的壁磷壁酸和跨越肽聚糖层得膜磷壁酸。 分) (1 3、 答: (1)选择适宜的营养物质。不同微生物对营养物质的需求并不相同,还有可能差别 很大。应根据其营养类型及生理特点配制针对性强的培养基或培养基质。 分) (2 (2)营养物质浓度及配比。浓度过低不能满足正常生长的需求,如果过高则可能起 抑制作用。特别要注意“碳氮比” (2 分) 。 (3)控制 pH 条件。 (1 分) (4)控制氧化还原电位。 (1 分) (5)原料来源的选择。 (1 分)

(6)灭菌处理要严格保证。 分) (1 4、答:根据质粒所编码的功能和赋予宿主的表型效应,可将其分为 6 种类型: 分) (2 (1)致育因子 (1 分) (2)抗性因子 (1 分) (3)Col 质粒 (1 分) (4)毒性质粒 (1 分) (5)代谢质粒 (1 分) (6)隐秘质粒 (1 分) 5、答:细菌的分类单元命名普遍采用国际上统一的“学名”制。细菌所有正式分类单元的 学名必须用拉丁词或其他词源拉丁化的词命名。 分) (1 细菌的分类单元有属名、种名、亚种名、属级以上分类单元。 分)可遵循《伯杰氏 (3 系统细菌学手册》的分类。 分) (1 (1) 属名: 用一个单数主格名词或当作名词用的形容词来表示,拉丁词,首字母大写。 (1 分) (2) 种名: 双明法命名,即种的学名由属名和种名组合而成。第一个词为属名,首字母 大写,第二个词为种名加词,常为形容词,如人名、地名、病名等。 分) (1 (3) 亚种名: 三元式组合,即由属名、种名加词和亚种名加词构成。 分) (1 6、答:微生物生长繁殖的控制方法,按采用的方法的性质有两大类: 化学因素法: (1)抗微生物剂,如抑菌剂、杀菌剂和溶菌剂等; (2)抗代谢物; (3) 抗生素 (3 分) 物理因素法: (1)高温处理; (2)高渗作用; (3)辐射作用; (3 分) (4)干燥; (5)超声波 (6)过滤处理 (2 分)

四、论述题(总分 48 分,第 1 题 10 分,第 2 题 12 分)
1、答:通常有 3 类方法:载体选择标记的鉴定、目的基因序列的鉴定和基因表达产物的鉴 定。 (一)载体选择标记的鉴定 (1)抗生素抗性选择法:外源 DNA 片段插入载体的位点位于抗生素基因之外,符合该插 入条件的重组体转化进入宿主细胞,则该细胞能在含该抗生素的培养基上生长,出现菌落。 (2 分) (2)插入失活法:外源 DNA 片段插入载体的某一抗生素基因之内,如载体常携带有氨苄 青霉素抗性基因或四环素抗性基因,若将外源 DNA 插入到其中一个抗性基因编码序列内, 导致相应的抗性基因失活。 (2 分) (3)β-半乳糖苷酶显色反应法:某些载体,携带有 lacZ’基因的一段序列,编码β -半乳 糖苷酶的 α 肽, X-gal 分解菌落呈蓝色。 使 如果外源基因插入到 lacZ’ 基因, 则不能使 X-gal 分解,菌落呈白色。 (1 分) (二)目的基因序列的鉴定 (1)菌落(或噬菌斑)的原位杂交 用一小段与所要筛选的目的基因互补的 DNA 或 RNA 作为核酸探针,与待筛选的菌落 (或噬菌斑)进行原位杂交。利用探针的放射性标记或荧光标记,与原平板上的菌落位置对 照,挑选出目的基因的克隆。 分) (1 (2)限制性酶图谱的鉴定 将初筛的阳性克隆进行培养增殖,提取重组质粒,内切酶进行 酶 切 , 通 过 凝 胶 电 泳 对 比 。 ( 1 分 )

(3)DNA 序列的测定 (1 分) (三)基因表达产物的鉴定 (1)免疫活性测定 (2)生物活性测定 (3)氨基酸序列的测定 (2 分) 2、答: (一)用固体培养基获得纯培养的方法有: (1)涂布平板法:将熔化的含琼脂的培养基倒入无菌培养皿制成无菌平板,冷却后,将一 定稀释度的样品悬液滴加到平板,将其均匀涂布于平板表面,培养后挑取单菌落。适合好氧 微生物。 分) (2 (2)稀释倒平板法:将样品做一些列稀释,然后分别取不同稀释度的少许,与溶化后温度 降低至 50℃的琼脂培养基混合,摇匀,于无菌培养皿中凝固,保温培养至出现菌落。适合 兼性好氧且能耐 50℃温度微生物。 分) (2 (3)平板划线法:用接种环无菌操作下蘸取样品,于无菌平板表面划线,如连续划线、扇 形划线等,微生物被逐渐分散,经培养后在一定区域得到单菌落。 分) (2 (4)稀释摇管法:将一系列盛有无菌琼脂培养基的试管加热,熔化并冷却至 50℃左右,将 待分离的样品进行梯度稀释,并迅速摇动均匀。冷凝后与上表面用石蜡密封以隔离空气。适 合厌氧微生物。 分) (2 (二)用液体培养基获得纯培养的方法:对某些个体较大的细菌、原生动物、藻类需要 用液体培养基获得其纯培养。方法为稀释法,操作如下:接种物在液体培养基中进行顺序稀 释,达高度稀释效果,使一支试管中分配不到一个微生物,如果稀释后的大多数试管中没有 微生物生长,则其中那个有微生物生长的试管得到的培养物很可能就是纯培养物。 分) (4


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