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实验二总糖和还原糖的测定_图文

生命科学学院
生物化学实验

糖的定量分析---还原糖的测定
刘敏
2017.9.30/10.11-12

Why, What, How
Traditional biochemistry principles

+
Big Data

Analysis

True & False

一、目的 二、原理 三、试剂与器材 四、步骤 五、结果计算 六、注意事项 七、思考题

一、目的:
理解还原糖的基本特征,掌握碱性铜试剂法测定 还原糖的原理和操作方法

二、原理
单糖以及含有游离醛基或酮基的寡糖,具有还原 性,属于还原糖类;多糖和蔗糖等属于非还原性糖 (?思考)。利用多糖能被酸水解为单糖的性质, 可通过测定水解后的单糖含量对总糖进行测定。
还原糖测定的滴定方法有多种,本实验采用硫 代硫酸钠间接滴定法(还有其它的滴定方法吗?)。

半缩醛羟 基

H 葡萄糖分子(环式) 葡萄糖分子(链式)

硫代硫酸钠间接滴定法原理:在碱性溶液中, 二价铜离子被还原糖还原成一价的砖红色氧化 亚铜(Cu2O)沉淀——Fehling’s solution (1849) 氧化亚铜在酸性环境中与定量的过量碘起反应 (氧化)成二价铜(蓝色),再用标准硫代硫 酸钠滴定剩余的碘,即可算出还原糖的含量。

反应方程式: 2NaOH + CuSO4=Cu(OH)2↓+ Na2SO4
COOK COOK Cu + 2 H2O

Cu(OH)2 + H―C―OH = H―C―O H―C―OH COONa 酒石酸钾钠 COOK 2 H― C ―O H―C ―O H―C―O COONa

可溶性的氧化铜络合物(蓝色) COOK H― C ―OH H―C―OH COONa 酒石酸甲钠

CHO Cu +(CHOH)4+ 2 H2O = 2 CH2OH 葡萄糖

COOH ( CHOH)4 + Cu2O↓ + CH2OH 葡萄糖酸

COONa

IO3? + 5 I? + 6 H
Cu2O + I2 + H
+

+

3 I 2 + 3 H2 O
Cu
2+

+ I -+ H2 O
2-

I2(剩余的) + 2(Na+ +S2O3)

2-

S4O6

+ 2 I-

因此,用硫代硫酸钠滴定剩余的碘,在有已知浓度 的标准还原糖浓度时,可以间接地计算出未知样品的还 原糖的含量。

?碱性铜试剂:硫酸铜 + 草酸钾
稳 定 性

?Fehling试剂:硫酸铜 + 酒石酸钾钠

?Benedict试剂:硫酸铜 + 柠檬酸钠+无水碳酸钠
用于尿糖的鉴定,较稳定可长期保存 (1911)

碱性铜试剂类作用原理相同,络合二价铜离子。

光化学法和电化学法;抽血和非抽血

三、试剂与器材
1. 样品:标准葡萄糖溶液、待测糖溶液 2. 试剂:(1)Fehling试剂; (2)0.005 mol/L硫代硫酸钠溶液; (3)2%碘化钾溶液; (4)0.5 mg/mL标准葡萄糖溶液; (5)1%淀粉指示剂。 3. 器材:试管、三角瓶、滴定管、电磁炉

四、操作步骤
1. 取6只试管,按照下表的次序加入试剂。另取6个

小三角烧瓶,按相应的试管顺序编号。
试剂 H2O 标准葡萄糖 待测溶液 (mL) (mL) (mL) 2 2 1 1 1 1 2 铜试剂 (mL) 4 4 4 4 4 沸 水 浴 中 煮 沸 15 分 钟

管号
空白 管 1 2 1

标准 溶液管 2 1 待测 溶液管 2

2

4

(注:用移液器量取溶液,禁用量筒!)

2. 各试管冷却后,摇动试管,使试管底部的红色沉淀分

散后倾入相应的三角瓶中;
3. 分别在每个试管中加入2mL 2%碘化钾溶液和2mL 2 mol/L H2SO4,以洗涤管中的残留物,并转入相应的三 角瓶中,最后再用1mL蒸馏水洗涤试管2次(均使用移 液管); 4. 用0.005 mol/L NaS2O3滴定至碘颜色接近消失时加入淀 粉指示剂5滴,继续滴定至蓝色消失为止(??)。

滴定管的使用

Notes

五、计算: X=
0.5(mg/ml) V空 -V标

×(V空-V待测)

X = ( x1 + x2 ) / 2
NOTE:数据结果的单位,没有单位的结果无意义,不给分。

六、注意事项!!!
1. 各试管的处理应一致,测定溶液应同时放入沸 水中,再同时从沸水浴中取出。 2. 在用碘化钾和硫酸洗涤试管时要洗净,否则会 影响滴定结果的准确性(未洗净会使结果?)。 3. 滴定终点时溶液呈现二价铜离子的浅蓝色,切 勿将它与近终点的碘蓝色混淆(如何区别?)。

七、 思考题

1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间接滴定?
两种滴定方法各有何优点? 2、提前终止各滴定会出现哪种误差?

3、分析X1与X2存在差异的原因?若差异较大说明什么?


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