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H5N1亚型禽流感疫苗对家禽的免疫效果观察


生物制品专题

H5N1亚型禽流感疫苗对家禽的免疫效果观察
赵香莲 1,梁丽娟 2,邓文星 2,边岱英 3,李 芳 2,苏益琼 1
(1. 广西柳州市动物疫病预防控制中心,柳州 545005;2. 柳州市鹿寨县动物疫病预防控制中心, 柳州 545005; 3. 柳州市水产畜牧兽医局,柳州 545005 ) DOI:10.3969/J.ISSN.1671-6027.2010.07.008
摘 要: H5N1 亚型禽流感疫苗对家禽进行免疫接种, 用 采用血凝 (HA 和血凝抑制 ) ) (HI 试验对其免疫效果进行检测, 根据检 测结果评估在临床上使用高致病性禽流感疫苗免疫的效果和质量, 为进一步验证 H5N1 亚型禽流感疫苗在实际生产中免疫程 序的科学性和有效性, 根据免疫抗体水平科学地、 适时地指导动物防疫, 同时提出在实际工作中的防控建议。 关键词: 高致病性禽流感; H5N1 亚型禽流感疫苗; 和 HI 试验; HA 免疫抗体水平; 防控建议 高致病性禽流感是由正粘病毒科流感病毒属 A 型 H5N1 等亚型流感病毒引起的以禽类为主的高度接触性传染 真性鸡瘟。 近年来在全球范围内已呈多发 病, 又名欧洲鸡瘟、 态势, 造成了相当大的经济损失和政治影响, 并直接威胁到 人类生命及公共卫生安全。在防控高致病性禽流感的工作 中, 疫苗免疫是我国采取的主要措施之一, 目前我国使用的 高致病性禽流感疫苗主要是 H5N1 亚型禽流感疫苗。鹿寨县 是柳州市的养殖密集区, 以肉鸡、 肉鸭和种鸭养殖为主, 规模 场以快速型肉鸭养殖为主, 农村散养鸭一般以地方小麻鸭养 殖为主,鸡场主要以 120 日龄的小麻鸡养殖为主,养殖量 2009 年已达 560 多万羽, 年出栏 371 万羽, 年末存栏 181 万 羽。这样高度密集的养殖量, 对防控高致病性禽流感疾病显 得非常严峻, 而高致病性禽流感疫苗免疫效果检测显得尤为 重要, 本次试验进一步验证了 H5N1 亚型禽流感疫苗在实际 生产中免疫程序的科学性和有效性, 通过血清学检测分析免 疫质量, 及时掌握流行病学动态和免疫效果, 根据免疫抗体 水平科学地、 适时地指导动物防疫, 同时提出在实际工作中 的防控建议。 1 试验材料 1.1 疫 苗 H5N1 亚型禽流感疫苗由柳州市动物疫病预防控制中心 提供,为哈尔滨维科生物技术开发公司生产,疫苗批号为 2009041, 接种后 14d 产生免疫力, 鸡免疫期为 6 个月, 鹅 鸭、 加强接种 1 次, 免疫期为 4 个月。 1.2 试验地点及动物 柳州市鹿寨县 9 个乡镇中的 19 个鸭场, 个鸡场, 13 32 个散养村屯饲养的鸡或鸭。 1.3 诊断试剂 禽流感病毒 H5 亚型 HI 试验抗原和禽流感病毒 H5 亚 型阳性血清由柳州市动物疫病预防控制中心提供, 生产厂家 为哈尔滨维科生物技术开发公司生产。效价为 1: 1024, 抗原 批号为: 200803, 阳性血清生产批号为 200801, 批准文号为 兽药生字 (2006 080018076。 ) 1.4 试验器材及试剂 高压灭菌器、 蒸馏水器、 广口瓶、 烧杯、 玻棒、 量筒、 精确 到 0.0001 的电子天平、 37℃恒温箱、 离心机、 刻度离心管、 试 作者简介: 赵香莲 (1963~ , ) 广西柳州人, 本科, 兽医师。 主要 动物疫病防治等工作。 从事动物疫病及防疫信息管理、 管架、 移液槽、 一次性 96 孔 “V” 型微量反应板, 多道微量移液 器 (5~50μL 或 25~125μL , ) 移液咀 (滴头) 微型振荡器, , 阿氏液、 (1mol/L,pH7.2 液、 PBS ) 1%鸡(鸭)红细胞等。 计时器、 2 试验方法及步骤 2.1 疫苗的免疫时间及程序 2.1.1 免疫接种时间: 2009 年春防即 3~4 月和秋防即 9~10 月。 2.1.2 免疫程序: 2~5 周龄的雏鸡 0.3mL/ 羽, 周龄以上的 5 2~5 周龄的雏鸭 0.5mL/ 羽,成年鸭为 1mL/ 鸡 0.5mL/ 羽, 羽, 于颈部皮下注射。 首次免疫接种疫苗 3 周后开始采血, 同 种鸭 蛋鸡和种鸭规模 时对 120 日养殖期的肉鸡和蛋鸡、 (注: 养殖场是在同等的饲养条件下) 进行第二次免疫, 第三次于 产蛋前进行, 随机抽取分组检测、 记录。 2.2 家禽血清的采集 家禽免疫 3 周后, 用一次性注射器于鸡、 鸭翅下静脉采 当天释出血清, 直接送到实验室, 送检的血 血 2~3 mL/ 羽, 清要求不溶血, 并且要记录好地址、 日龄、 养殖规模、 免疫时 间和次数、 使用疫苗批号, 所有血清均置于低温冰箱 - 20℃ 保存, 待检, 3d 内检测完毕。 于 2.3 血凝试验(HA) 参照 《高致病性禽流感诊断技术》 (GB/T18936- 2003), 遵 守每次试验前都进行抗原标准化, 试验后 HI 效价为 1: HA 1024, 配制 4U 病毒诊断液的抗体效价为 1: 256。 2.4 血凝抑制试验 ) (HI 参照 《高致病性禽流感诊断技术》 (GB/T18936~2003)微 1024。结果判定, 量法进行, 其中阳性血清对照 HI 效价为 1: 以完全抑制 4 个 HAU 抗原的血清最高稀释倍数作为 HI 滴 度。 (注意: 只有阴性对照孔血清滴度不大于 2log2, 阳性对照 孔血清误差不超过 1 个滴度, 试验结果才有效。) 价小于 HI 或等于 2log2 判定 HI 试验阴性; 价等于 3log2 为可疑, HI 需 重复试验; 价大于或等于 4log2 判定 HI 试验阳性。 HI 即个体 HI 效价≥24 16 为合格, (1: ) 群体免疫合格率应在 70%以上。 3 试验结果 结果见表 1、 3。表 1 为 2009 年度鹿寨县春、 2、 秋防期间 集中检测的规模场、 散养家禽血清总体免疫效果情况, 为能 有效验证 H5N1 亚型禽流感疫苗在实际生产中免疫程序的 有效性和普遍性, 尽量减少在饲养管理水平上的差 科学性、 别, 我们选择了该县随机抽检的规模养禽场免疫来观察免疫

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表1 2009 年度鹿寨县散养禽血清的 HI 试验结果 传染源作为防疫重点, 从而省去对快速型肉鸭禽流感的免疫。 4.2 免疫抗体水平与禽种、 家禽日龄之间有很大的关系 根据试验结果统计分析: 日龄首免的肉鸡、 20 鸭产生的 HI 抗体效价显著高于 10 日龄、 日龄首免的鸡、 这可能 14 鸭。 与禽只免疫过早禽体内有母源抗体的干扰有关, 刘守川等的 试验表明, 母源抗体对抗原有明显的中和作用, 其次家禽日 龄太小, 禽只免疫器官发育不完全, 对疫苗应答较差, 而在 10 日龄前后的家禽免疫其他疫苗较多,也可能是对免疫系 统的刺激较大, 导致免疫无应答或者应答效果较差等, 都会 直接影响禽流感疫苗的免疫效果。结果表明: 该县对家禽进 行 H5N1 亚型禽流感疫苗免疫接种是可行有效的, 但是在相 同周龄注射疫苗的鸡抗体效价要高于鸭的抗体效价,这可能 与水禽天然能携带禽流感病毒而不发病,其耐受性比较强 有关。 4.3 免疫抗体水平与家禽免疫次数有很大关系 从表 2、 3 可看出, 表 首免鸡、 鸭总共接种 H5N1 亚型禽 流感疫苗 188 只,检测时只有 88 只合格,免疫合格率为 46.81%, 未达到农业部规定的群体免疫合格率为 70%以上的 标准, 还有 53.19%的抗体水平未达到保护水平, 而有 12.77% 的抗体水平处于临界值, 而二免后总共抽检 73 只, 63 只 有 合格, 合格率达到 86.3%, 群体免疫水平已达到抵抗强毒感 染的水平; 说明家禽在首免后需按农业部规定程序 3 周后再 及时进行加强免疫, 才能有效地提高免疫抗体水平; 三免后, 鸡鸭合格率分别达到 100%和 88.1%,免疫有效期可达 4~6 个月,这与反复免疫产生的免疫应答和免疫记忆有关。应答 和免疫记忆有关。 根据该县另外实验: 在免疫过程中, 有些乡 镇对 5 周龄以下的鸭使用了 0.8mL/ 羽的剂量,鸭只可见有

效果情况, 2、 分别为规模养鸭、 表 3 鸡场的免疫效果情况。 4 讨论与防控建议 4.1 免疫总体情况 本试验随机抽检了鹿寨县 19 个鸭场, 个鸡场, 个 13 32 免疫合格血清 511 份, 总体 散养村屯, 家禽血清共计 726 份, 合格率为 70.39%。 (注: 免疫合格率是指血凝抑制滴度≥24 的血清份数占检测血清份数的百分数 。 ) 可见该县对肉鸡、 鸭 进行 H5N1 亚型禽流感疫苗免疫接种是可行有效的, 总体上 但鸭 达到了农业部家禽群体免疫合格率为 70%以上的要求。 免疫效果不佳, 免疫合格率为 47.45%, 主要原因分析:肉鸭的 血样是在出售前一天采样的, 而肉鸭的禽流感疫苗免疫一般 这可能与鸭只免疫日龄太小, 禽只免疫 在 10 日龄左右进行, 器官发育不完全, 对疫苗应答较差有关, 其次还有可能存在 母原抗体的干扰而直接影响禽流感疫苗的免疫效果; 如果在 20 日 龄 左 右 进 行 加 强 免 疫 , 而 肉 鸭 的 饲 养 周 期 一 般 为 38~42d, 未能达到屠宰前 28d 停药的疫苗说明要求, 这样不 但起不到免疫的作用, 还存在一定的食用安全问题。是否可 以在实际生产中可以对种鸭加强免疫, 以增加仔鸭的母源抗 应该还 体水平, 延长保护时间, 有待探讨。从本实验结果看, 要从加强饲养管理和环境消毒, 防止野鸟进入养殖场, 隔断 表2

2009 年度鸭场的免疫抗体水平 (滴度 HI 试验结果 )

表3

2009 年度鸡场的免疫抗体水平 (滴度 HI 试验结果 )

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2010 年第 7 期

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专论与综述

猪伪狂犬病的研究进展
杨庆芳 1,2,宁官保 1
(1. 山西农业大学动物科技学院,太谷
关键词: 猪伪狂犬病; 病原学; 诊断; 防治

030801;2. 晋中职业技术学院,榆次

030600)

DOI:10.3969/J.ISSN.1671-6027.2010.07.009
猪伪狂犬病 (Pseudorabies, PR) 是由猪伪狂犬病病毒 (Pseudorabies virus, PRV)引起的一种高度接触性传染病。猪 带毒猪直接接 是本病的主要宿主和传染源, 健康猪与病猪、 触可感染本病。 通常引起妊娠母猪流产、 木乃伊胎、 死胎和产 弱仔; 初生仔猪出现腹泻及神经症状、 感染率和死亡率可达 100%; 母猪出现返情屡配不孕; 育肥猪表现生长迟缓, 饲料 报酬降低等, 感染后多耐过, 不发病呈隐性感染, 造成长期带 毒排毒, 成为最危险的传染源。 该病最早发现于美国, 后来由匈牙利科学家首先分离 出病毒。世纪中期, 在东欧及巴尔干半岛的国家流行较广, 20 世纪 60 年代之前, 猪被感染后其症状比较温和, 在养猪 业中未造成重大经济损失。 世纪 60~70 年代, 由于强毒株 20 的出现, 猪场暴发的数量显著增加, 而且各种日龄的猪均可 感染,其症状明显加剧。 这种变化不仅存在于美国, 在西欧各 国如德国、 法国、 意大利、 比利时、 爱尔兰等国家也同样存在。 几年之后, 此病相继传入新西兰、 日本、 我国的台湾严重影 响种猪场生产。 我国自 1947 年刘永纯首次报道该病以来, 随 着养猪业集约化规模化的发展,已有 20 多个省市报道发生 了该病, 并在许多种猪场呈暴发流行趋势, 给我国养猪业造 成了巨大的经济损失。猪感染伪狂犬病病毒后,免疫系统受 到损害, 因而易继发其它疾病, 如猪瘟、猪繁殖与呼吸障碍 通讯作者: 宁官保 (1961~ , ) 山西闻喜人, 副教授, 主要从 事动物传染病诊断和防制方面的研究 较好的免疫应答,但也未能达到抵抗强毒攻击的保护能力。 该县对 120 日龄养殖期的小麻鸡都经过 2 次免疫, 以后对蛋 种鸭则每 4 个月进行一次加强免疫, 正是由于有可靠的 鸡、 免疫, 使家禽抗体效价全年维持在保护水平之内, 才能有效 防止高致病性禽流感的发生和流行。 4.4 防控建议 HI 主要检测血清中针对 HA 蛋白的抗体,具有特异性, 高致病性禽流感疫苗免疫抗体的产生在很大程度上反映了 机体对病毒感染的抵抗力水平。因此, 加强禽流感疫苗的免 疫力度, 是预防和控制禽流感最有效的手段。 在家禽生产中, 2 周龄以下的家禽首免后需进行加强免疫, 才能产生足以抵 种鸭除按肉鸡、 鸭进行 抗强毒攻击的免疫抗体水平, 而蛋鸡、 加强免疫外, 另外需每隔 4 个月再加强免疫才能达到常年保 持抵抗强毒攻击的能力。 同时长期不定时地对免疫家禽进行 血清学监测, 根据免疫抗体水平来指导临床免疫, 还可以准 确掌握疫情动态, 根据免疫抗体水平科学地指导生产, 进行 综合症和猪传染性胸膜肺炎。 1 病原学 PRV 属于疱疹病毒科甲型疱疹病毒亚科, 猪疱疹病毒Ⅰ 型。其完整病毒粒子为圆形, 直径 150~180nm, 核衣壳直径 为 105~110nm。 有囊膜, 囊膜表面有长约 8~10nm 呈放射状 排列的纤突。 PRV 对外界环境的抵抗力较强, 55℃ 50min、 80℃ 3min 或 100℃瞬间才能将病毒杀灭。 在低温潮湿环境下, 6~8 pH 时病毒能稳定存活; 在干燥条件下, 特别是在阳光直射下, 病 毒很快失活。 PRV 对乙醚、 氯仿、 福尔马林等各种化学消毒剂 都敏感。 PRV 只有一种血清型, 但不同毒株在毒力和生物学特性 能在多种组织培养细胞 等方面存在差异。PRV 具有泛嗜性, 内增殖, 并产生明显的细胞病变和核内嗜酸性包涵体, 其中 以兔肾和猪肾细胞最为敏感。 PRV 基因组为线状双链 DNA, 大小约 180kb, G+C 含量 高达 74%。病毒基因组由长独特区(Unique long region, UL)、 短独特区(Unique short region, US)以及位于 US 两侧的末端 TR)与内部重复序列(Internal re重复序列(Terminal repeat, peat, IR)组成。对 PRV 基因组序列测定发现其由 72 个阅读 框组成, 可编码 70 种蛋白, 目前已发现和命名的有 gB、 gC、 gD、 gG、 gI、 gL、 gN 11 种糖蛋白。编码 gC、 gE、 gH、 gK、 gM、 gE、 gG、 gM 和 gN 的基因为病毒复制非必需的, gC、 gE gI、 gB、 gD、 和 gI 与病毒的毒力有关。此外, 胸苷激酶(Thymidine kinase, 合理地选择疫苗、 制定免疫计划, 保证免疫的有效性。 参考文献
[1] 国家标准化管理委员会.GB/T18936-2003 《高致病性禽流感诊断 技术》 .[S].北京:中国标准出版社, 2003. [2] 董海岚等.樱桃谷肉鸭禽流感抗体消长规律的试验[J].中国兽医 杂志, 2009, (5 :41. 45 ) [3] 张评浒, 等.不同 NA 亚型 H5 禽流感疫苗在鸭群的免疫效力及母 源抗体对免疫效力的影响[J].中国家禽, (20 : 2005 ) 13-16。 [4] 金大春, 等.致病性禽流感免疫抗体水平的监测与分析[J].畜禽业, 2005 ) 38-39. (6 : [5] 刘守川, 等.不同日龄免疫母鸡后裔对 H9N2 亚型禽流感攻毒保 护的比较试验[J].中国畜牧兽医, 2005, (7 : 32 ) 42-43. [6] 薛峰, 等.不同免疫程序的鸡群新城疫和禽流感抗体水平与免疫 保护之间的相关性试验.中国兽医杂志, 2005, (9 : 41 ) 23-25. [7] 刘丽贞, 《高致病性禽流感及其防控对策》 畜牧兽医科技信 等 [J], 息, 2009, 7-9. 8,

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