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纤溶酶


纤溶酶 plasmin

目录
01
简介

02
结构

03
作用

04
分离纯化

05
活力测定

06
药理作用和应
用前景

简介
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纤溶酶(plasmin)是指能专一降解纤维 蛋白凝胶的蛋白水解酶,是纤溶系统中的 一个重要组份。体内凝血和纤溶两系统是 相互依存紧密相联的。机体一旦产生凝血 反应,也几乎同时激活了纤溶系统,使体 内多余的血栓移去,并通过负反馈效应使 体内纤维蛋白原的水平降低,从而避免纤 维蛋白的过多凝聚,隶属于纤溶系统。

纤溶酶的结构

纤溶酶的作用
01 02 03 04 降解纤维蛋白和纤维蛋白原 水解多种凝血因子 (Ⅱ.Ⅴ.Ⅶ.Ⅷ.Ⅹ.Ⅺ) 使纤溶酶原转变为纤溶酶 水解补体等

纤溶酶的分离与纯化
01 02 03 04
从传统发酵中分离出纤溶酶

蛹虫草菌丝发酵产生的纤溶酶

从蜈蚣中分离提取出纤溶酶

从蚯蚓身体分离纯化出纤溶酶

蚯蚓纤溶酶的分离与纯化

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以野生环毛蚓 (Pheretima)为材料 ,经匀浆抽提、热 变性、硫酸铵分步沉淀、SephadexG 75凝胶过滤和DEAE 纤 维素离子交换柱层析等纯化步骤 , 得到纯度较高的蚯蚓纤 溶酶 (EFE) ,具有强烈的溶解血纤维蛋白的作用。同时对 酪蛋白和 BAEE也具有较强的水解作用 , 但对 ATEE无水解活 性。实验表明蚯蚓纤溶酶能被苯甲磺酰氟强烈抑制 , 说明 该酶是丝氨酸蛋白酶、属胰蛋白酶类。金属离子Na+、K+、 Mg2 +对此酶有一定的抑制作用 ,Hg2 +对EFE有强烈抑制作 用 ,而Ca2 +可提高此酶活力

纤溶酶的活力测定
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1.纤维蛋白原一琼脂糖平板的制作依据 Astrup 纤维蛋白平 板法l4 J。

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2. 标准曲线的制作在平板上选定 5 个孔 ,每孔内加入稀释 好的UK标准品10 ,浓度依次是50,40,30,20 ,10 va/ ml,置 37℃恒温水浴箱中,保温18 h,测每个溶圈的互为 垂直的2个直径(mil1),在双对数坐标纸上作标准曲线 。

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3. 供试品的测定在平板上选定较规则的孔,加入供试品液 101 ,以磷酸盐缓冲液 (PBS) 为对照,测溶圈直径,计算面 积,由标准曲线计算其活力。

药理作用和应用前景
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微生物纤溶酶有两类不同的作用机制:一类是通过激活纤 维蛋白溶酶原成为纤溶酶间接降解纤维蛋白,如链激酶 葡 激酶和BKⅡ等,为纤溶酶原激活剂;另一类则可直接降解 纤 维 蛋 白 溶 解 血 栓 , 这 一 类 纤 溶 酶 的 种 类 较 多 , 有 SW1﹑DFE﹑QK﹑TPase以及 Jeot-Gal 酶等。有的纤溶媒兼具 直接降解和激活纤溶酶原的双重作用,CK﹑根霉12#纤溶酶 和 Bacillus.spnov.SK006 等纤溶酶属于此类型。另外,还 有些纤溶酶有2种以上的作用方式,如纳豆激酶有直接降解 纤维蛋白,激活尿激酶原,刺激组织型纤溶酶原激活剂tPA 的产生降解和失活,纤溶酶原激活剂 tPA 的抑制剂 PAI-1 四 种。 TPase 在直接溶解纤维蛋白的同时也能够降解 PAI-1 使 其失活从而发挥作用。

应用

1.纤溶酶目前在临床上主要是各种胶囊制剂,如、普恩 复、百奥、博洛克,溶栓胶囊等,而注射剂还没问世。EFE 作为外源蛋白质 可能对人体产生免疫原性,而M 小的组分 对人体的免疫原性低些,所以有必要分离纯化低分子组分,为 注射剂的研制开发打下基础 。

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2. 动物试验结果和口服给药方式研究显示纳豆激酶是 一种有潜力的纤溶酶,纳豆激酶的片剂﹑冲剂﹑胶囊﹑口 服液及针剂已有研究并形成专利,市场上也有纳豆﹑胶囊 ﹑纳豆激酶﹑肠溶胶囊﹑纳豆激酶素等保健品销售,但纳 豆激酶在人体中的使用效果﹑安全性等数据依然相当有限 或缺乏,其他微生物纤溶酶在溶栓作用专一性﹑体外体内 药理实验及临床试验等方面更有待进一步的研究。

谢谢


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