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2016年山西自主招生生物模拟试题:土壤中微生物的分离与计数


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2016 年山西自主招生生物模拟试题:土壤中微生物的分离与计数
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1:选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物,通过缺氮培养基、含青霉素培养基、含氨的无 机培

养基,可从土壤中分离出的微生物依次是( ) A、硝化细菌、放线菌、根瘤菌 B、根瘤菌、青霉菌、圆褐固氮菌 C、圆褐固氮菌、放线菌、硝化细菌 D、圆褐固氮菌、酵母菌、硝化细菌

2:伊红—美蓝培养基常用来鉴别大肠杆菌,其原理是( ) A、大肠杆菌在该培养基中形成特定的菌落 B、大肠杆菌能使培养基改变颜色 C、大肠杆菌菌的代谢产物与伊红—美蓝结合,使菌落呈深紫色,并有金属光泽 D、大肠杆菌能在该培养基中很好生活,其余微生物不能很好生活

3:下列关于微生物的培养和分离的叙述中,不正确的是 A、细菌能在培养基中以二分裂方式迅速扩增 B、噬菌体和大肠杆菌都可直接在蛋白胨培养基中增殖 C、灭菌的目的是消灭与培养菌竞争的杂菌 D、与平板划线法相比,稀释涂布平板法分散细菌得到单菌落的效果更好

4: 如表是关于几种微生物能利用的碳源物质和氮源物质的描述,描述准确无误的微生物有几种( )

A、1 种 B、2 种 C、3 种 D 、4 种

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5: 从土壤中分离以尿素为氮源的细菌,下列实验操作不正确的( A、将土壤用无菌水稀释,制备 10 ~10 土壤稀释液 B、将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上 C、用加入刚果红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌 D、从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株
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6: (2012 浙江自选)幽门螺杆菌( Hp)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制 成菌液后,进行分离培养。实验基本步骤如下:

请回答: (1)在配制培养基时,要加入尿素和酚红指示剂,这是因为 Hp 含有____,它能以尿素作为氮源;若有 Hp,则菌 落周围会出现____色环带。 (2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是____灭菌。 A、高压蒸汽 B、紫外灯照射 C.70%酒精浸泡 D、过滤

(3)步骤 X 表示____ 。在无菌条件下操作时,先将菌液稀释,然后将菌液____到培养基平面上。菌液稀释的目的 是为了获得____菌落。 (4)在培养时,需将培养皿倒置并放在____ 中。若不倒置培养,将导致____。

(5)临床上用

呼气试验检测人体是否感染 Hp,其基本原理是 Hp 能将

标记的____分解为





7: (2014 河南开封质检)一种广泛使用的除草剂(含氮有机物)在土壤中不易被降解,长期使用可污染土壤。为

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修复被该除草剂污染的土壤,可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌(已知该除草剂在水中溶解度低,含一 定量该除草剂的培养基不透明) 。

(1)制备土壤浸出液时,为避免菌体浓度过高,需将浸出液进行稀释处理。现有 1L 土壤浸出液,用无菌吸管吸取 1 mL 液样至盛有 9 mL 无菌水的试管中,依次稀释至 稀释度。各取 0.1 mL 已稀释 倍的菌液分别接种到三

个培养基上培养,得到的菌落数分别为 55、56、57,则每升原土壤浸出液样中菌体数为____。 (2)要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌,从用途方面来看,上述培养皿中培养基的特点是____ (3)接种技术的核心是____。在划线接种时,连续划线的目的是将聚集的菌种逐步 ____,培养时,只有很少菌落 出现,大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是____或有氧条件抑制了某些细菌的生长。 (4)在培养基上形成的菌落中,无透明带菌落利用的氮源主要是 ____,有透明带菌落利用的氮源主要是____,据 此可筛选出目的菌。实验结果如图显示的 A~E 五种菌株中,____ 是最理想菌株。

(5)科研人员用放射线处理该细菌获得两个突变株 A 和 B,然后对突变株 A 和 B 进行实验,结果如下表所示:

突变株 A 不能在一般培养基上生长的原因是_____。 突变株 A 和 B 混合在一起接种于一般培养基中能生长的最可 能原因是____

8: (2015 湖北荆州期末统考)人和哺乳动物的尿中含有尿素,大量尿素的存在会对环境造成污染。土壤中有些细 菌含有脲酶,可将尿素作为其生长的氮源。现对土壤中的这类细菌进行分离实验,请回答下列问题: (1)分离培养细菌时必须进行无菌操作, 包括培养基和各种器皿都必须是无菌的, 常用的灭菌方法有____、 和____。

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(2)将样液进行一系列的梯度稀释,然后接种培养。在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在 ____旁进行操作。接 种后的培养皿____于 37℃的____中培养。 (3)用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌,从功能上划分该培养基属于 培养基。若培养基中存在 能分解尿素的细菌,其菌落周围会出现红色环带,这是由于尿素被分解产生的____ 使 pH 升高,酚红指示剂产 生颜色变化,从而证明这一菌株可以尿素为氮源。变色区域越大,表明该菌株利用尿素的能力____。 (4)与全营养培养基中的菌落相比,以尿素为氮源的培养基中菌落数 A、多 B、少 C、相等 D、几乎为零 ( )

9: 自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯,然后进行数量的测定。下 面是对大肠杆菌进行数量测定的实验,请回答有关问题。 步骤如下:

①制备稀释倍数为









的系列稀释液。

②为了得到更加准确的结果,应选用____法接种样品。 ③适宜温度下培养。 结果分析:

(1)测定大肠杆菌数时, 在对应稀释倍数为 A.-个平板,统计的菌落数是 230

的培养基中, 得到以下几种统计结果, 与事实更加接近的是____ 。

B、两个平板,统计的菌落数是 220 和 260,取平均值 240 C、三个平板,统计的菌落数分别是 21、212 和 256,取平均值 163 D、四个平板,统计的菌落数分别是 210、260、240 和 250,取平均值 240 (2)一同学在稀释倍数为 106 的培养基上测得平板上菌落数的平均值为 212,那么每毫升样品中的菌落数约是(涂 布平板时所用的稀释液体积为 0.2 mL)____。 (3)用这种方法测定菌体密度时,实际活菌数量要比测得的数量____(多/少) ,因为____ 一。

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10: 下面是分离分解尿素的细菌所用的培养基,据表回答下列问题:

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(1)该培养基中含有的最主要碳源是,____。 (2)该培养基按物理性质划分属于____培养基,该培养基具有选择作用的原因是____ (3)在该培养基中,可以通过检测 pH 的变化来判断尿素是否被分解,所依据的原理是_______,所用方法是在培 养基中加入____,若尿素被分解,则培养基变成____色。

11: (每空 1 分,共 9 分)有些细菌可分解原油,从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从污染的土壤 中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题: (1)在筛选该菌种的过程中,应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上,从功能上讲,该 培养基属于 培养基。 (2)纯化菌种时,为了得到单菌落,避免培养液中菌体浓度过高,需将培养液进行 处理之后接种,常采用的 接种方法有两种,即 。 (3)为了筛选出高效菌株,可比较单菌落周围分解圈的大小,分解圈大说明该菌株的降解能力 。 (4)统计菌落数目,通过统计平板上的菌落数推测活菌数,为保证结果准确,一般选择菌落数在 的平板上计 数,但实际活菌数量往往比测得数量 (“多”或“少”) ,原因是 。若测得的平均值为 50,则每克样品中的 菌落数是 。 (稀释度是 10 ,涂布平板时所用稀释液的体积为 0.1mL) 。
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12:土壤是“微生物的天然培养基”,下面是有关土壤中分解尿素的细菌分离和计数的实验过程,请根据下图回答 相关问题:

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(1)能分解尿素的细菌代谢类型为__,应从富含有机质的土壤表层取土样。 (2)为分离出土壤中分解尿素的细菌,应该用 的培养基进行分离,并加入___指示剂进行鉴别。 (3)若取土样 5g,应加入__ml 的无菌水配制成稀释 10 倍土壤溶液。因土壤中细菌密度很大,需要不断加以稀 释,配制成如图所示的不同浓度的土壤溶液。取样稀释前,一定要___以减少误差。将 10 -10 倍的稀释液分 别吸取 0.1mL 加入到固体培养基上,用____将菌液铺平。这种接种方法称为____。 (4)将接种的培养皿放置在 37℃恒温培养箱中培养 24h~48h,观察并统计具有____(现象)的菌落数,结果如 下 表 , 其 中 _ _ _ _ 倍 的 稀 释 比 较 合 适 。
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13: 【生物一选修 1:生物技术实践】 (15 分) 请回答下列生物技术方面的问题。

Ⅰ. 微生物接种的方法中最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法,前者是通过 (1) 在琼脂固体培养基表面连续 (2) 的操作,将 (3) 逐步 (4) 到培养基的表面。后者则是将菌液进行一系 列的 (5) ,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,然后进行 (6) 。菌落是在 固体培养基上由 (7) 细胞繁殖而来的形态 (8) 的子细胞群体。 Ⅱ. 如图为提取胡萝卜素的装置图,请据图回答下列问题: 装置图中④内加入的萃取液最好是 (9) ,原料在加 入前,一般要进行 (10) 处理。[⑤]的作 用是 (11) 。该萃取过程采用的 是水浴加热,其目的是 (12) 。

14: (10 分) 某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观 察计数。请回答与此实验相关的问题。 (1)培养基中含有的蛋白胨为细菌培养提供了 。对培养基进行灭菌,应该采用的方法是 。 (2)为了尽快观察到细菌培养的实验结果,应将接种了湖水样品的平板置于 中培养,培养的温度设定在 35℃。要使该实验所得结果可靠,还应该 。 (3)培养 20 小时后,观察到平板上有形态和颜色不同的菌落,这说明湖水样品中有 种细菌。一般说来,菌落总数越多,湖水遭受细菌污染的程度越 。 (4)如果提高培养基中 NaCl 的浓度,可以用于筛选耐盐细菌,这种培养基被称为 。

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15: (8 分)利用微生物分解玉米淀粉生产糖浆,具有广阔的应用前景。现有野生 菌株,但其对淀粉的转化效率低,某同学尝试对其进行改造,以获得高效菌株。 实验步骤如下: ( 1)配制培养基,该培养 基的碳源应为 。 (2)对培养基进行_________(消毒、灭菌) ;然后将 接入到培养基上。 立即用适当剂量的紫外线照射,其目的是 。 (3)在培养基配制和微生物培养过程中,除考虑营养条件外,还要考虑______、 ______和渗透压等条件。 (4)为了鉴别是否有对淀粉的转化效率高的菌株出现,在已形成菌落的培养基中 加入碘液,观察菌落周围培养基的颜色变化和变化范围的大小。如果出现 现象,则该菌落即为所需菌株的菌落,理由是 。

答案部分

1、D 本题考查的是选择培养基的作用。 缺氮培养基可从土壤中分离出能自行固定氮的圆褐固氮菌, 含青霉素培养基可 从土壤中分离出非细菌的酵母菌,含氨的无机培养基可从土壤中分离出硝化细菌。D 正确。故本题选 D。

2、C

试题分析:伊红为酸性染料,美蓝为碱性染料。大肠杆菌能分解乳糖产生大量的混合酸,菌体带 H+,故菌落被 染成深紫色,从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色,伊红和 美蓝不能结合。故选 C 考点:本题考查伊红—美蓝培养基鉴别大肠杆菌的原理。 点评:本题意在考查考生的理解能力,属于容易题。

3、B B 试题分析:细菌繁殖方式是二分裂方式,A 正确;噬菌体是没有细胞结构的病毒,需要在活细胞中才能生活,在 蛋白胨培养基中不能增殖,B 错误;灭菌目的是防止杂菌和培养菌发生竞争,C 正确;稀释涂布平板法比平板划 线法分散细菌得到单菌落的效果更好,D 正确。

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考点:本题考查微生物的培养和分离的知识。意在考查能独立完成“生物知识内容表”所列的生物实验,包括理解 实验目的、原理、方法和操作步骤,掌握相关的操作技能,并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合运用的能 力。

4、B (1)硝化细菌可以进行化能合成作用和硝化作用,所以碳源是 CO2、氮源是 NH3,正确; (2)根瘤菌是异养微 生物,可以进行生物固氮作用,所以碳源是含碳有机物、氮源是 N2,错误; (3)大肠杆菌是异养微生物,所以 碳源是含碳有机物(葡萄糖) 、氮源是含氮有机物,如氨基酸,正确; (4)乳酸菌是异养微生物,所以碳源是含 碳有机物(葡萄糖) 、氮源是含氮有机物,如氨基酸等,错误。

5、C A、将土壤用无菌水稀释,然后经过系列稀释,制备 10 ~10 土壤稀释液;A 正确。B、将不同浓度的土壤稀释 液涂布于不同平板上;B 正确。C、用加入酚红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌,刚果红指示剂是用于 分离分解纤维素的菌;C 错误。D、分解尿素的菌在分解尿素时产生氨气,氨气能使酚红指示剂显红色,从周围 出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株;D 正确。
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6、(1)脲酶红(2)D(3)接种涂布单(4)恒温培养箱无法形成单菌落(5)尿素 此题考查微生物的分离与培养知识。(1)幽门螺杆菌(Hp)含有脲酶,能以尿素为氮源,在加入尿素和酚红指示剂的 培养基中培养 Hp,由于尿素经脲酶的降解可产生碱性的 , 能使培养基中的酚红由红黄色变成红色,

故菌落周围会出现红色环带。(2)由于尿素加热会分解,对尿素溶液进行灭菌最好用 G6 玻璃砂漏斗过滤。(3)微生 物的分离和培养步骤是: 配制培养基一灭菌、 倒平板一接种一培养。 为获得单菌落, 接种操作前应先将菌液稀释, 然后将菌液涂布到培养基平面上即可。(4)微生物培养时需将培养皿倒嚣并放在恒温培养箱中,若不倒置培养, 则无法形成单菌落。(5)幽门螺杆菌能将 人体是否感染幽门螺杆菌。 标记的尿素分解为 和 ,故临床上常用 呼气试验检测

7、(1) 5.6×

(2)培养基中添加了该除草剂(3)防止杂菌污染,保证培养物的纯度稀释获得单个菌落培养基中缺少

这些细菌可利用的氮源(4)氮气该除草剂 E(5)突变株 A 缺乏合成营养物质甲所需要的酶突变株 A 生长需要营养物 质甲,突变株 B 可以提供;突变株 B 生长需要营养物质乙,突变株 A 可以提供

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(1)由每毫升样品中的菌株数=(C÷V) ×M 知 lmL 土壤浸出液菌体数为(56÷0.1)× 体数为 5.6×

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,故 1L 原土壤浸出液样中含菌

。(2)因该除草剂为含氮有机物,故该选择培养基应是以除草剂为唯一氮源的选择培养基。(3)接种

要在酒精灯火焰旁进行,以防止杂菌污染,保证培养物的纯度。平板划线的目的是稀释菌体,获得单个菌落。(4) 在选择培养基上能固氮和能分解除草剂的微生物均能生长,但固氮微生物菌落周围无透明圈。E 菌落周围的透明 圈面积最大,说明该菌落中的微生物分解这种除草剂的能力最强。(5)突变菌株 A、B 能分别在添加甲、乙的培养 基上生长,说明菌种 A、B 分别不能合成甲、乙物质,即缺少合成相应物质的酶。二者同时接种到一般培养基上 都能生长,最可能的原因是二者相互提供了对方不能合成的物质。

8、(1)高压蒸汽灭菌灼烧灭菌干热灭菌(2)酒精灯火焰倒置恒温培养箱(3)鉴别氨越强(4)B (1)常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌和干热灭菌。(2)在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在酒精灯火 焰旁进行操作,防止杂菌污染;接种后的培养皿倒置于 37℃的恒温培养箱中培养,培养皿倒置既可避免培养基 中的水分过快地挥发,又可防止皿盖上的水珠落人培养基,造成污染,恒温为微生物的快速生长提供温度条件。 (3)含有酚红指示剂的培养基从功能上划分属于鉴另 9 培养基;尿素被分解产生的氨使 pH 升高,酚红指示剂产生 颜色变化;变色区域越大,表明该菌株利用尿素的能力越强。 (4)全营养培养基中营养全面,菌落数多,以尿素 为氮源的培养基中只有能分解尿素的微生物能生长,其他微生物不能生长,菌落数少,选 B。

9、步骤②:稀释涂布平板(1)D(2) l.06×

个(3)多当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的是一个菌落

若对大肠杆菌进行计数,则需要用稀释涂布平板法接种样品。 (1)应选取多个菌落数相差不大的平板计数,取其 平均值。(2)212÷0.2× =l.06× (个) 。(3)因为菌落可能由 1 个或多个细菌连在一起繁殖而成,所以实际活菌

数量要比测得的数量多。

10、(1)葡萄糖(2)固体该培养基中唯一的氮源是尿素,只有能分解尿素的微生物才能在此培养基上生长繁殖(3)微 生物产生的脲酶能将尿素分解成氨,氨会使培养基的 pH 升高 酚红指示剂 红

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培养基中的葡萄糖、尿素和琼脂都含有碳元素,其中葡萄糖是最主要的碳源,尿素主要提供氮元素,琼脂是凝固 剂。由于琼脂的存在,该培养基属于固体培养基。由于尿素是该培养基的唯一氮源,只有能分解尿素的微生物才 能在上面生存,因此该培养基具有选择作用。尿素分解会产生氨,氨能使酚红指示剂变红,据此可以推测培养基 中的尿素是否被分解。

11、 (每空 1 分,共 9 分) (1)原油 选择 (2)系列稀释 平板划线法和稀释涂布平板法 (3)强 (4)30~300 多 当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落 略 5×10
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12、 (1)异养需氧 (2)以尿素为唯一氮源 酚红 (3)45 摇匀 涂布器 稀释涂布平板法 (4)红色环带 10 或 10
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试题分析: (1)分解尿素的细菌代谢类型是异养需氧型;所以需从富含有机质的土壤表层取土样。 (2)分解尿素的细菌,其氮源是尿素,而其他微生物的氮源是有机氮,所以欲分离分解尿素的细菌,应用以尿 素为唯一氮源的培养基进行分离,并加入酚红指示剂进行鉴别。 (3)将 5g 土样稀释 10 倍,则应加入 45ml 无菌水,为了减少误差,则在取样稀释前一定要振荡摇匀。将稀释液 铺平则应利用涂布器,该方法称为稀释涂布平板法。 (4)以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养分解尿素的细菌后,如果 pH 值升高,则指示剂将变 红,所以该实验应培养具有红色环带的菌落数,根据表格中数据可知稀释 10 或 10 后,菌落数较少可计数。 考点:本题考查微生物的分离和计数。 点评:本题难度中等,属于考纲理解层次。解答本题的关键是理解分解尿素的细菌只以尿素作为氮源,而其他微 生物则以含氮有机物作为氮源,这样就可以确定选择培养基的成分。
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13、 (1)接种环(1 分) ,划线(1 分) ,聚集的菌种(1 分) ,稀释分散(1 分) 。梯度稀释(1 分) ,恒温培养(1 分) 。单个(1 分) ,可见(1 分) 。 (2)石油醚(1 分) ,粉碎(1 分) 、干燥(1 分) 。防止加热时有机溶剂的挥发(2 分) 。防止引起有机溶剂燃烧、 爆炸(2 分) 。 Ⅰ.平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

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稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释, 将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面, 然后 进行恒温培养。菌落是在固体培养基上由单个细胞繁殖而来的形态可见的子细胞群体。 Ⅱ. 胡萝卜素属于有机物,所以萃取剂选择不溶于水的石油醚,原料加入前,一般要进行粉碎、干燥,冷凝管的 目的是防止加热时有机溶剂的挥发,为了防止引起有机溶剂燃烧、爆炸,所以该过程要进行水浴加热。

14、 (1)氮源(或氮源和碳源) (1 分) 高压蒸汽灭菌(1 分) (2)恒温培养箱(1 分) 同时取一个空白培养基接种无菌水作为对照放置于相同条件下培养(或同时取一个空白培养基放置于相同条件 下培养) (3 分) (3)多(1 分) 高(1 分) (4)选择培养基(2 分) (1)蛋白胨中含有碳和氮,能够为细菌培养提供碳源和氮源。对培养基灭菌的方法是高压蒸汽灭菌。 (2)培养细菌应用恒温培养箱,为了使结果更可靠,应进行对照实验,即同时取一个空白培养基接种无菌水作 为对照放置于相同条件下培养。 (3)菌落的形态和颜色反映了细菌的种类。 (4)培养基中 NaCl 用于筛选耐盐细菌,属于选择培养基。

15、 (8 分) (1)玉米淀粉 (2)灭菌 野生菌株 对野生菌株进行人工诱变 (3)温度 酸碱度 (4)浅色、范围大 转化效率高的菌株能大量分 解淀粉形成糖浆,所以淀粉与碘呈现的蓝色浅且菌侏周围的浅色区域较大 略


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