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实验五-激素对血糖浓度的影响及血糖浓度的测定


实验五

激素对血糖浓度的影响 及血糖浓度的测定

实验性质:综合性

实验:激素对血糖浓度的影响
--------------- 邻甲苯胺法测血糖

一、目的及要求
1.掌握血糖的测定原理及方法。 2.掌握血糖的正常范围及意义。 3.熟记胰岛素及肾上腺素对血糖浓度的影响 并解释其作用机制。

二、原理:
3H2O 冰乙酸, 沸水浴 1)葡萄糖 5-羟甲基-2-呋喃甲醛

2) 5-羟甲基-2-呋喃甲醛 + 邻甲苯胺 西夫氏碱(蓝绿色) 3)同样处理标准管与样品管

三、试剂:(略) 四、操作步骤: 实验分组:2 大组 / 实验室 ,即胰岛素组和 肾上腺素组。 4 或 5 小组 / 大组,即胰前和胰后组 或肾前和肾后组。

1、取预先饥饿 14-16 小时的正常家兔 2只, 称重。 2、从耳缘静脉采血:剪毛 → 二甲苯棉球擦 拭 → 干棉球擦干 → 碘酒、酒精消毒 → 7号针头穿刺取血→放入加有抗凝剂(草 酸钠:2mg / ml)的烧杯中→摇匀。

3、1只家兔 肌肉注射胰岛素( 5U / Kg , 规格: 5U / ml ),另一只家兔 皮下注射 肾上腺 素(0.5 mg / 只,规格: mg / ml )。
4、30分钟后,分别从耳缘静脉取血或心脏 取血。

5、无蛋白血滤液的制备: 取短试管 4只,各加胰前、胰后、肾前、 肾后等抗凝血 0.4 ml,用滤纸擦净粘附于吸 管尖端外表面的血液,再加入 5%三氯醋酸 3.6ml,边加边摇,充分混匀。待血液由鲜 红色变为暗红色(或酱油色),3000rpm 离心5min,上清即为无蛋白血滤液。

6、取试管 6 支,编号,按下表操作(单位:ml)
空白管 H2O
标准液

标准管


胰前管
— —

胰后管
— —

肾前管
— —

肾后管
— —

1.0


1.0


胰前无蛋 白血滤液
胰后无蛋 白血滤液 肾前无蛋 白血滤液



1.0












1.0












1.0




肾后无蛋 白血滤液 — 邻甲苯胺试剂 2.5







2.5

2.5

2.5

2.5

1.0 2.5

各管分别混匀,同时置于100℃水浴加
热8分钟,流水冷却 。630 nm进行比色, 以空白管校正零点,读取各管光密度。

五、计算

血糖(mg%) = O.D测定 / O.D标准 × 0.1 × 1 × 1 / 0.1 × 100

= O.D测定 / O.D标准 × 100

六、注意事项: 1、采血及注射激素时,应尽量使家兔保持安 静。 2、由于血细胞不断从血浆摄取葡萄糖加以利 用,因此, 采血后及时进行检测,否则血 糖浓度将逐渐降低。
3、取血量要准确。

4、无溶血现象及高脂血症时,可以不制备血 滤液,而用血清或血浆直接检测。 5、邻甲苯胺是一种带微黄色的油状液体,久 放后于光线或空气接触易氧化变质;如色 泽变红,最后变棕黑色,此时必须重新蒸 馏提纯。

6、硫脲是抗氧化剂,可使邻甲苯胺试剂稳 定,减低空白管读数,并使反应化合物 呈现纯兰绿色。 七、临床意义: 正常情况下,血糖浓度在各种因素调 解下,维持相对恒定;一旦调节发生紊 乱,可导致高糖血症或低糖血症。

1、生理或暂时性高血糖: 餐后1~2小时,注射葡萄糖后,情绪紧 张激动时,肾上腺素分泌增多或注射该药 后,可出现暂时性高血糖。

2、病理性高血糖: 多见于胰岛素相对或绝对不足(糖尿 病)。其它内分泌系统的疾病,如甲状腺 功能亢进、垂体前叶功能亢进(巨人症或 肢端肥大症)、肾上腺皮质功能亢进(库 欣综合征)、嗜铬细胞瘤、胰岛?-细胞瘤 等。

3、生理性低血糖或暂时性低血糖: 见于饥饿或剧烈运动后,注射胰岛素 或口服降糖药后(多见于药物反应或超量 用药)。

4、病理性低血糖:
可见于胰岛细胞瘤引起的胰岛素分泌 过多症,严重肝病由于肝的生血糖作用降 低而使血糖来源减少,对抗胰岛素的激素 分泌不足如垂体、肾上腺皮质或甲状腺功 能减退等。

八、思考题: 1、血糖的来源与去路有哪些?
2、调节血糖的激素主要有哪些?其作用机制 如何?

3、在实验中应注意哪些问题?

九、实验报告: 10分 实验报告按医学论文格式书写,包括 中文摘要(目的、方法、结果、结论四部 分,2分)、材料(1分)、方法(2分)、 结果(2分)、讨论(3分)和参考文献等 部分。

电动离心机的使用 :
离心机是利用离心力对混合液体进行 分离沉淀的一种专用仪器。利用电动离心 机可使混合液体中的悬浮微粒快速沉淀, 借以分离各种物质成分。

按离心时转速的不同,离心机可分为:

离心机
普通(低速) 高速 超速

转速 / 分
4 000 rpm 2 0000 rpm 7 0000 rpm

低速离心机的使用: 1、使用前先检查 变速旋纽 是否在“0”处, 离 心机套管底部需放有 橡皮垫 。
2、选择大小合适的离心管(用小试管代 替),待离心溶液盛量占管 2/3 体积为宜。

3、将盛有待离心溶液的两支离心管连同套管 置台秤上,调节两边重量使之达到平衡。 如不平衡,可调整离心管内容物量或加减 离心管套管内水量。
每次操作都必须严格遵守平衡的要 求,否则离心管破裂,损伤离心机部件, 甚至造成严重事故,应十分小心。

4、平衡好的离心管及管套,按对称方位放到 离心机插孔中。不用的离心套管取出,盖 严离心机盖。

5、开动时,慢慢拨动旋钮使逐渐增加到所需 的速度。当到达离心机所需的时间后,再 调旋钮,进行逐渐减挡降速,最后将旋钮 拨到 “0” ,待离心机自动停止后,才能打开 离心机盖取出样品,不连续使用时拔下插 头。

6、用完后,倒尽离心管内水,倒立放置使其 干燥。 电动离心机使用的注意事项 : 1、离心机应放在坚固的水平面上。

2、启动要慢,若启动快,不仅多余电流会变 成热能,易烧坏线包,而且离心管受震动 大,容易洒液及破管。停止时也要慢,绝 不能用手阻止离心机强迫其停止。

3、离心过程中,若听到特殊响声,表明离心 管可能破裂,应立即停止离心。如果管已 经破裂,应清除破玻璃片;若管未破,也 需要重新检查离心管是否平衡后再离心。


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