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8年制生物化学与分子生物学 第25章 基因结构分析的基本策略


第二十五章

基因结构分析的基本 策略
Basic strategy for analyzing gene structure
目录

主要内容: 第一节 基因序列结构的生物信息学检索和比对 分析 第二节 基因转录起始点的鉴定 第三节 启动子的结构及功能分析

第四节 编码序列结构分析

目录

第一节
基因序列结构的生物信息学 检索和比对分析

目录

?基因或DNA序列比对 ?就是在数据库中对基因序列或 DNA 序列进行 比对分析,以其能够推测出其结构、功能及在 进化上的联系. ?比对方法:
1. 双重比对 2. 多序列比对 序列比对目的: ?判断两个或多个序列间是 否具有足够的相似性

直接的数量关系

从而判断二者之间是否具 有同源性
目录

进化上曾具有共同祖先

序列比对的结果: ?取代

?插入
?缺失
Mouse:

保守序列: ?可能是共同进化的标志
缺失?

?可能并不代表功能的重要性

GGKDSCQGDSGGPVVCNG----QLQGVVSWGDGCAQKNKPGVYTKVYNYVKWIKNTIAAN

Crayfish:
GGKDSCQGDSGGPLAASDTGSTYLAGIVSWGYGCARPGYPGVYTEVSYHVDWIKANAV--

保守序列

插入? ?当两个序列非常相似时,是否一定

说明它们具有相似的功能?
目录

?NCBI数据库
NCBI首先创建GenBank数据库
?于 1991 年 开 发 了 Entrez 数 据 库 检 索 系 统 , 该 系 统 整 合 了 GenBank、EMBL、PIR和SWISS-PROT等数据库的序列信息 以及MEDLINE有关序列的文献信息,并通过相关链接,将他 们有机地结合在一起 ?NCBI 还 提 供 了 其 他 数 据 库 , 包 括 在 线 人 类 孟 德 尔 遗 传 (OMIM)、三维蛋白结构的分子模型数据库(MMDB)、人 类 基 因 序 列 集 成 ( UniGene ) 、 人 类 基 因 组 基 因 图 谱 (GMHG)、生物门类(Toxonomy) 等数据库
目录

目录

1. 各种数据库的介绍
(1) Nucleotide
?该数据库由国际核苷酸序列数据库成员美国 国立卫生研究院GenBank、日本DNA数据库 (DDBJ)和英国Hinxton Hall的欧洲分子生物学 实验室数据库(EMBL)三部分数据组成

?三个组织每天交换各自数据库中的新增序列 实现数据共享
目录

(2) Genome
?即基因组数据库,提供了多种基因组、完全染 色体、重叠序列图谱以及一体化基因物理图谱

(3) Structures
?即结构数据库或称分子模型数据库(MMDB), 包含来自X线晶体学和三维结构的实验数据
?NCBI 已经将结构数据交叉链接到书目信息、序列数据库和 NCBI 的 Taxonomy 中运用 NCBI 的 3D 结构浏览器和 Cn3D ,可 以很容易地从Entrez获得分子的分子结构间相互作用的图像
目录

(4) Taxonomy
?即生物学门类数据库,可以按生物学门类进行检 索或浏览其核苷酸序列、蛋白质序列、结构等

(5) PopSet
?包含研究一个人群、一个种系发生或描述人群 变化的一组组联合序列 ?PopSet既包含了核酸序列数据又包含了蛋白质 序列数据

目录

(7) 文献数据库
?PubMed:生物医药科学的检索系统 ?OMIM : 孟德尔遗传学数据库是人类基因和基 因疾病的目录数据库

?该数据库包括原文信息、图片和参考信息, 同时还可以链接到 Entrez 系统 MEDLINE 数 据库中相关文献和序列信息 ?其他:书目,杂志,文章引用匹配等

目录

2. NCBI数据库检索
?在检索框中输入检索词,检索词间默认逻辑关 系为AND,检索规则基本同PubMed
?可 以 通 过 下 拉 菜 单 选 择 记 录 的 显 示 格 式 , 通 常 选 择 GenBank Report格式或FASTA Report格式。

?当选择GenBank Report格式后,屏幕显示较完整的基因记录,包 括 : 基 因 位 点 (Locus ) 、 基 因 定 义 (Definition ) 、 基 因 存 取 号 (Accession )、 核酸编号 (NID )、关键词 (Keywords )、 来源 (Source )、组织分类 (Organism) 、参考文献 (Reference) 、 著者 (Author ) 、 题 目 (Title ) 、 期 刊 (Journal ) 、 Medline 存 取 号 (Medline)、序列特征(Features)、基因(Gene)、CDS(cDNA)、 等位基因 (Allele ) 对等的肽 (Mat-Peptide )、计算碱基数 (Base Count)、原序列(Origin)。 ?而FASTA Report格式仅包括检出序列的简要特征描述。
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例如:人EPO基因序列检索
?输入关键词,选择合适的程序

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?向下拉寻找符合目标的条目

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?点击此条打开连接

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?向下拉寻找关注的内容

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?可以直接拷贝保存相关内容
?凡是连接的地方都可以点击查看

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3. NCBI数据库搜索工具
?Entrez:

是一个用以整合NCBI数据库中信息的 搜寻和检索工具 ?Entrez 的一个强大和独特的特点 ?BLAST:

是检索相关的序列,结构,和参考 ? 文献的能力

是一个 NCBI 开发的序列相似搜索程序,还可作 为鉴别基因和遗传特点的手段 ?
?NCBI 提供的附加软件工具有:开放阅读框寻觅器 ( ORF Finder ), 电子 PCR , 和序列提交工具, Sequin和BankIt
目录

?Entrez:

?

目录

?BLAST:

目录

?BLAST程序
程序 Blastp 数据库 蛋白质 查询 蛋白质 内容 使用取代矩阵寻找较远的关系: 可以进行SEG过滤 Blastn 核苷酸 核苷酸 寻找较高分值的匹配,对较远关系 不太适用 Blastx 核苷酸 (翻译) Tblastn 蛋白质 核苷酸 蛋白质 对于新的DNA序列和ESTs的分析极 为有用 对于寻找数据库中没有标注的编码

(翻译)
Tblastx 核苷酸 (翻译) 核苷酸 (翻译)

区极为有用
对于分析EST极为有用

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点击核酸序列blast,在框内输入序列:

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选择搜索条件:

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选择特殊程序:

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比较两个序列之间的相似性:

目录

以上仅简介了NCBI相关数据库及工具软 件关于其他数据库及软件工具等信息见书中 第二十五章表1-5。

目录

第二节
基因转录起始点的鉴定

目录

主要内容: 一、基因转录起始点的序列特征

二、基因转录起始点的序列分析

目录

一、基因转录起始点的序列特征
1. 真核基因及其调控元件
顺式作用元件
-GCGC---CAAT---TATA

结构基因

转录起始点

增强子

TATA box

CAAT box

GC box

目录

2. 转录起始点(TSS)
II 型启动子的TSS:

?没有明确的保守序列
?有一种趋势,即mRNA 的第一个碱基是A, 其侧翼碱基倾向于是嘧啶

?与mRNA第一个碱基对应的位置标记为-1区
?-3 ~ +5区域被称作起始子 (initiator)
-40 -30 -20 -10 -3

Start site
+10 +1 +5

+20

Initiator Py2CAPy5

ATG
目录

二、基因转录起始点的序列分析
思考:

?转录起始点 (TSS)位于基因编码序列的5?端
?基因编码区是指能体现在多肽链中的核苷酸 序列 ?多肽链是以mRNA为模板经翻译合成的

因此,
分析鉴定TSS的方法都是以cDNA为切入点
目录

1. cDNA克隆测序
mRNA
AAAAAn AAAAAn AAAAAn

反转录酶 Oligo (dT)15-18 mRNA
CCCCC AAAAAn TTTTT15-18

cDNA第一链 cDNA第二链

反转录酶的末端转移酶活性 Oligo (dG)15-18
TTTTT15-18

nGGGG nCCCC

cDNA第一链

与线性载体相连接 要求:

克隆扩增,5?端测序分析

cDNA的5?端完整无缺
目录

2. cDNA末端快速扩增技术(RACE)
?传统的RACE:
mRNA
反转录酶 Oligo (dT)15-18 mRNA 3?cDNA 末端转移酶 dGTP
TTTTT15-18

AAAAAn

AAAAAn TTTTT15-18 -5?

nGGGGG

锚定PCR扩增
nGGGGG TTTTT15-18

nCCCCC
锚定引物
特异引物 PCR产物
目录

?Deep-RACE: 用寡核苷酸替代mRNA的5′端帽结构以及 发光标记巢氏 PCR 引物实现高通量鉴定转录 起始点 mRNA
5?-p 帽
AAAAAn

牛小肠磷酸酶 (CIP) 5?-帽
AAAAAn

烟草酸焦磷酸酶 (TAP) 5?AAAAAn

将5?-RACE adaptor (寡核苷 酸)加到脱帽RNA分子上
5?-RACE adaptor (寡核苷酸)
AAAAAn

反转录酶

10nt 随机引物
目录

5?-RACE adaptor 5?-RACE adaptor 5?-RACE adaptor 5?-RACE adaptor

长短不同的cDNA

随机引物

用10nt随机引物与5?-RACE引物 进行PCR扩增 PCR产物
随机引物

5?-RACE adaptor 5?-RACE adaptor 5?-RACE adaptor 5?-RACE adaptor

以5’-RACE引物和5’端甩尾的基因 特异性反向引物进行巢氏PCR 5?-RACE adaptor 以5’-RACE发光标记引物对PCR混 合物直接进行一次性测序

分析基因转录起始点
目录

3.连续分析基因转录起始点
?在RACE的基础上,通过在转录本5 ′端引入一 个特殊的II型限制性核酸内切酶识别位点,实 现了基因5 ′端短片段串联连接产物一次测序分 析多个基因转录起始点的目的

?主要有两种方法:
?5 ′端连续分析基因表达(5 ′ -end serial analysis of gene expression, 5 ′ SAGE) ?帽分析基因表达(cap analysis gene expression, CAGE)
目录

(1) 5 ′ SAGE
?5′SAGE是在PCR过程中将MmeI酶切位点引物cDNA的5′ 端,通过酶切和连接获得不同短片段重复序列,并对重 复序列进行测序获得大量片段序列信息 ?不同序列的短片段代表不同基因的转录起始点 (TSS)

MmeI: ?是一种特殊的II型限制性核酸内切酶

?识别的序列不是回文结构,而是不对称的DNA 序列5′-TCCRAC-3′(R代表G或A)
?在识别位点下游18~20碱基处切开双链DNA
目录

Gppp

mRNA
用BAP和TAP处理

AAAAAAAAn

p
XhoI MmeI

AAAAAAAAn
在RNA的5?端加上寡核苷酸帽

5? cDNA 5? 5?
PCR Biotin 5? Biotin-标记引物

AAAAAAAAn RT 反转录酶
随机引物

AAAAAAAAn

5?
酶切消化 MmeI 用亲和素-生物素,可以将5?-端片 段与其他片段分离开 20 mer
目录

亲和素

Biotin 5?

5?

连接 Biotin 5? 20 mer 20 mer

5?

5? 5? Biotin

PCR扩增 Biotin 5?

5?
酶切消化

5? 5? Biotin

XhoI

自身连接

串联体 测序分析
目录

(2) CAGE
CAGE与5′SAGE非常相似

所不同的是:
?CAGE不需要在RNA上加接头,而是用oligo(dT) 引物先进行第一链cDNA的合成 ?然后通过捕获帽结构,将含有MmeI和另一内 切酶位点如XmaJI的linker加到单链全长cDNA的 3′末端

目录

Cap

mRNA AAAAAAn
反转录酶 Oligo (dT)15~18

Cap
cDNA XmaJI Biotin MmeI 连接 捕获5?-帽结构 单链linker

AAAAAAn TTTTTTTn

TTTTTTTn
cDNA第二链的合成

AAAAAAn TTTTTTTn
酶切

MmeI
用亲和素-生物素,可以将5?-端

亲和素 20 mer

片段与其他片段分离开
目录

连接第二个linker PCR(用linker1和linker2作引物) XmaJI 20 mer XbaI

Linker 1 酶切消化 XmaJI, Xbal

Linker 2
XmaJI和XbaI是同尾酶: XmaJI:C^CTAGG XbaI: T^CTAGA 纯化,串联连接,克隆

串联体 测序分析
目录

第三节
启动子的结构及功能分析

目录

主要内容: 一、启动子的结构分析 二、启动子的功能分析

目录

启动子(promoter) ?是一段能被蛋白质识别的、参与特定基因转录 调控的DNA序列 ?II型启动子通常位于结构基因的上游

?共通序列(consensus sequence)是其特征性序列

?共通序列和启动子所处的位置是研究 启动子的重要线索

目录

例如:

共通序列

?原核基因的共通序列:

-10区:Pribnow box(T77A76T60A61A56T82序列)
-35区:T69T79G61A56C54A54 序列

?真核基因的共通序列:

真核基因启动子在 -50区域附近(大约5%~30% 基 因启动子在-25~-30区域)有TATA box(TATAAA序列)
-40 -30 TTGACA -20 -10 TATAAT -3

Start site
+10 +1 +5

+20

Initiator

ATG
目录

一、启动子的结构分析
主要方法:
?利用PCR技术克隆启动子 ?利用核酸-蛋白质相互作用方法研究启动子 ?生物信息学预测启动子

目录

(一)利用PCR技术克隆启动子
1. 根据已知基因序列直接进行PCR扩增
基因组DNA 基因上游序列 特异性基因序列

PCR扩增

根据基因序列合成一条反向引物

正向引物用随机引物
特异引物

随机引物

注意: ?真核基因有内含子,应该根 据mRNA序列设计特异性引物

克隆及测序分析

?特异性引物尽可能靠近基因 的5?端
目录

2. 利用TSS钓取启动子
Cap 5?mRNA

AAAAAAn
反转录

Cap 5?-

cDNA

AAAAAAn TTTTTTn

插入载体,克隆扩增

PCR扩增 5? -

以基因特异引物与载体引物配对

测序分析基因转录起始点序列

以TSS序列为引物,基因组序列为模板,与随机引物 配对进行TSS上游序列的PCR扩增
目录

3. 利用环状PCR钓取启动子
基因组DNA

酶切消化 基因组DNA片段

直接环化连接

加上接头后环化连接
接头

PCR扩增

根据基因上游序列 设计一对反向互补 PCR扩增 引物 ?加接头环化PCR不依赖 特异基因序列 ?可用于筛选启动子

根据接头序列设计引物

克隆
测序分析

克隆
测序分析
目录

(二)利用核酸-蛋白质互作方法研究启动子
?启动子是一段能被蛋白质识别和结合的DNA 序列,因此,能够检测核酸-蛋白质相互作用 的研究方法都可以用于启动子的研究中

主要方法:
?足迹法(酶足迹法,化学足迹法) ?电泳迁移率变动实验(EMSA) ?染色体免疫沉淀(ChIP)

目录

1. 用足迹法研究启动子
足迹法(Footprinting) ?利用DNA电泳条带连续性中断的图谱特点判断 与蛋白质结合的DNA区域
基本流程:
蛋白与未标记的 竞争DNA结合 蛋白与标记 的DNA结合

DNA与蛋白质相互作用

凝胶电泳

切割DNA
凝胶电泳
放射自显影

分析电泳图谱

目录

(1)酶足迹法 (Enzymatic footprinting)
利用能切割DNA的酶处理DNA-蛋白质混合物, 然后通过电泳进行分析 ? DNase I足迹法 (DNase I footprinting) 是一种利用DNase I 随机切割双链DNA,从而 确定DNA结合蛋白在DNA上结合位点的方法 ? 核酸外切酶III足迹法

(Exonucleoase III footprinting)
是利用核酸外切酶III(Exo III)的3??5?外切酶 活性从3?末端切割双链DNA的特性,确定蛋白质在 DNA上的结合位点的常用方法
目录

DNase I 足迹法
dsDNA

单链末端标记

DNA结合蛋白

酶切消化 DNase I (控制反应时间)
产生长短不同的片段 但蛋白质结合区被保护

目录

变性凝胶电泳

M

No-pro

Pro-DNA

蛋白质结合区

对在凝胶上出现空白区域的DNA进行克隆测 序,即可确定结合蛋白质的DNA序列

目录

(2)化学足迹法 (Chemical footprinting)
?是利用能切断DNA骨架的化学试剂处理DNA蛋白质复合物,从而通过化学试剂无法接近结 合蛋白质的 DNA 区域而确定 DNA 的蛋白质结 合位点 主要方法: ?羟自由基足迹法 ?体内足迹法

目录

1)羟自由基足迹法 (Hydroxyl radical footprinting)
?利用化学试剂产生的羟自由基攻击DNA分子表面 脱氧核糖骨架使DNA断裂 ?当DNA结合蛋白将脱氧核糖遮盖时,自由羟基无 法攻击而使这个区域的DNA受到保护

羟自由基

化学试剂

变性凝胶电泳

电泳图谱上出现空白区的地方就是结合蛋白质的DNA

目录

2)体内基足迹法 (In vivo footprinting)
?用化学试剂对活细胞进行体内处理,使DNA在细胞内 受到化学修饰,然后裂解细胞,用化学法或酶法进行足 迹实验。 ?甲基化干扰实验 (Methylation interference assay) 是利用化学试剂如硫酸二甲酯(Dimethyl sulfate, DMS)对活细胞DNA进行甲基化修饰,从而干扰蛋白质 与DNA的结合。 ?乙基化干扰实验 (Ethylation interference assay) 是利用化学试剂对活细胞DNA进行乙基化修饰,从 而干扰蛋白质与DNA的结合。
目录

正常对照

化学修饰

化学试剂

提取DNA

提取DNA

?化学修饰对蛋白质与 DNA 的结合 有干扰,因此,体内足迹实验也 叫干扰实验

?电泳图谱需与未修饰的 DNA 样品 进行比较,在未修饰样品中出现 空白区的位置是体内发生化学修 饰的DNA区域

切割DNA

DNase I 或化学试剂

变性凝胶电泳分析
目录

2. 用电泳迁移率变动实验研究启动子 电泳迁移率变动实验 (Electrophoretic mobility shift assay, EMSA) ?是利用结合蛋白质的DNA片段在凝胶中迁移滞 后的特点,通过电泳分离研究核酸-蛋白质互作 的方法 ?又称为凝胶阻滞实验(Gel retardation assay)

目录

标记的DNA片段

细胞蛋白质提取物

蛋白质与DNA结合 凝胶电泳

蛋白质-DNA复合物 电泳迁移滞后

显影 滞后条带表明DNA 是与蛋白质结合的 区域

目录

3.用染色体免疫沉淀技术研究启动子
染色体免疫沉淀

(Chromatin immunoprecipitation, ChIP)
?是在保持蛋白质与染色体DNA结合的同时,将染色 体切割成小片段并沉淀下来 ?非变性ChIP:是先用核酸酶处理细胞核,将染色体 消化成碎片,然后用合适的抗体将结合有蛋白质的染 色体片段通过免疫沉淀选择出来,再以PCR或核酸杂 交技术对DNA序列进行分析 ?变性ChIP:是先用甲醛处理细胞,使蛋白质与DNA 在细胞内发生交联,然后分离染色体并进行剪切,用 特异性抗体与DNA结合蛋白相结合,以沉淀法分离 DNA-蛋白质复合体 前面章节已介绍,这里不再详述

目录

(三)生物信息学预测启动子
?真核基因组的测序正在以不断增长的速度进行着, 目前已经可以获得大约50 个完整真核生物基因组的 序列信息, ?预计在未来几年内将会完成更多的基因组测序工作

?对基因组注释工作中最难的就是精确鉴定和描绘启 动子,因此,启动子的预测就显得非常重要 预测启动子的切入点
?启动子的结构特征

?启动子在染色体上的位置
目录

1. 启动子的结构特征 典型启动子

核心启动子:一般在TSS上游-35区域以内
近端启动子:一般涉及TSS上游几百个碱基

远端启动子:一般涉及TSS上游几千个碱基
含有增强子或沉默子 ?一些特征性的结构 TSS附近的CG岛经常出现在启动子中 共通序列 (consensus sequence)
目录

2. 启动子的预测分析 ?启动子数据库 ?EPD (Eukaryotic promoter databases) ?TRRD (Transcription regulatory regions databases)

?基因转录起始点数据库 (DBTSS)
这些数据库主要通过计算机识别、判 断及分析,在数据库中寻找启动子的特异 性特征结构。

目录

二、启动子的功能分析
?启动子通常是基因上游参与基因转录调控的DNA 序列。由于启动子中的顺式作用元件在基因的特 异性表达中发挥重要作用,因此,可以通过连接 报告基因研究启动子的功能。 1. 报告基因 (Reporter gene) ?是研究者们为了制造一种可在细胞培养条件下或动 植物体内作为筛选标志的易检测信号,通过分子生物 学操作将发光蛋白或酶的编码基因附加到一个感兴趣 基因上或插入基因调控序列下游,从而监测感兴趣基 因的表达或分析基因调控序列的活性 。 目录

?常用的报告基因 ?荧光蛋白编码基因: ?在蓝色光源照射 下发绿光 ?能催化荧光素 (luciferin)

绿色荧光蛋白 (GFP)
红色荧光蛋白 (dsRed)

?蛋白酶:
荧光素酶 (luciferase)

发生氧化反应发光

?-半乳糖苷酶 ?能使细菌在X-gal存
在条件下变成蓝色
目录

2. 报告基因的应用
?监测基因的转染效率

报告基因与目的基因分别插入各自启动子 下游,实现报告基因的组成性表达模式
?监控目的基因的表达 报告基因与目的基因融合共同受控于一个 启动子,报告基因的表达即代表目的基因的表 达 ?研究启动子的活性

报告基因插入被研究启动子下游,通过观 察报告基因的表达情况推测启动子活性

目录

启动子捕获技术 (promoter trapping):是一种 研究启动子活性的筛选方法 ?基本流程: 构建启动子捕获载体 观察报告基因的表达
MCS

候选启动子序列
插入MCS 报告基因

观察报告基因的表达

转染细胞

ori 启动子捕获载体
目录

第四节

编码序列结构分析

目录

编码序列 (coding sequence): 通常是指能体现在蛋白质氨基酸序列 中的基因信息

主要内容
一、基因编码序列的结构特征

二、基因编码序列的结构分析

目录

一、基因编码序列的结构特征
基因的编码序列具有一些特征性序列
比如: ?开放阅读框架 ?蛋白质翻译的起始密码子和终止密码子 ?真核基因的外显子(编码序列)和内含子 (非编码序列)之间有特殊序列

目录

(一)开放阅读框架
开放阅读框架 (open reading frame, ORF)

?是指生物基因组中含有能潜在编码蛋白质的一段核苷 酸序列 ?在基因序列中,ORF位于起始密码子(start codon) 和终止密码子(stop codon)之间 密码子:
?是由三个核苷酸组成的DNA序列,也称作三联密码子 ?生物体基因组中总共有64种密码子,其中三个终止密 码子,61个编码氨基酸的密码子 目录

分析一段DNA序列中是否存在ORF:
从理论上说,一般需要对双链DNA序列的 6种 阅读框架进行分析,每一条链分析三种阅读框架

例如:
1)5?-UCU AAA AUG GGU GAC-3?
(其中AUG是起始密码子) 2)5?-U CUA AAA UGG GUG AC-3? 3)5?-UC UAA AAU GGG UGA C-3? (其中UAA是终止密码子) 只有真正的ORF可以不遇到终止密码子
目录

(二)mRNA选择性剪接的序列特征
mRNA的选择性剪接 (alternative splicing):

?是指基因外显子转录产物RNA以不同方式进行 切割再连接的过程 ?经剪接所产生的mRNA可以翻译成不同的蛋白质, 从而导致一个基因可以编码一个以上蛋白质 真核基因的内含子在与外显子交界区域有共 通序列 (consensus sequences):
?内含子的5?端有GU序列,3?端有AG序列
目录

(三)基因外显子的序列特征
基因外显子可以被分成三部分

?能够被翻译成蛋白质的编码区
?5?-非翻译区(5?UTR) ?有作为蛋白质翻译起始

?3?-非翻译区(3?UTR) 重要元件的Kozak序列:
?3?UTR位于终止密码子 下游,含有poly A尾的加

由起始密码子AUG及其 周围序列组成

尾信号AATAAA序列

目录

二、基因编码序列的结构分析
?基因的编码序列是指能体现在成熟 mRNA 中 的核苷酸序列,因此,与 mRNA 互补的 cDNA 成为研究编码序列的主要切入点. 主要方法: ?cDNA文库的编码序列筛选 ?RNA剪接分析编码序列

?用数据库分析编码序列
?对各种方法所获得的 cDNA片段的序列 在基因数据库中进行同源性比对, 通过 染色体定位分析、内含子 / 外显子分析、 ORF分析及表达谱分析等

?高通量分析 RNA 剪接的方法 主要有三种: 基于DNA微点阵分析、交联免 疫沉淀(CLIP)和体外报告基 因测定法
目录

小结:
?基因结构分析的切入点已经从一个基因的克 隆测序,发展到如今在基因组范围的高通量 筛选,因此,研究策略也发生了变化,基因 数据库在不知不觉中占据了重要地位。

?基因结构特点成为基因组范围内高通量扫描 基因的重要靶标,基因的转录起始点、启动 子以及编码序列是基因的重要结构特征

目录


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