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BCA蛋白含量检测


凯基 BCA 蛋白含量检测试剂盒
Cat Number:KGET13 For Research Use Only

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一、 试剂盒说明 BCA 蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一 BCA 法研制 而成,实现了蛋白浓度测定的简单,高稳定性,高灵敏度和高兼容性。检测浓度下限达到 25 微克/毫升,最小检测蛋 白量达到 0.5 微克,待测样品体积为 1~20 微升。 二、 试剂盒组份 组 份 Cat: KGPBCA 试 (100 assay 酶标 板/20assay 1mL 比色杯) 蛋白标准溶液(0. 5 μg/μL ) BCA 试剂 A BCA 试剂 B 三、 操作步骤 A. 酶标板操作 1. 标准曲线的绘制:取一块酶标板,按照下表加入试剂 孔号 蛋白标准溶液(μL) 去离子水(μL) 对应蛋白含量(μg) 2. 3. 4. 0 0 20 0 1 1 19 0.5 2 2 18 1.0 3 4 16 2.0 4 8 12 4.0 5 12 8 6.0 6 16 4 8.0 7 20 0 10.0 2 mL 20 mL 0.4mL Cat: KGPBCA (250 assay 酶标板 /50assay 1mL 比色杯) 5 mL 25 mL×2 1mL

根据样品数量,按 50 体积 BCA 试剂 A 加 1 体积 BCA 试剂 B(50:1)配制适量 BCA 工作液,充分 混匀; 各孔加入 200μL BCA 工作液; 把酶标板放在振荡器上振荡 30sec,37℃放置 30 分钟,然后在 562nm 下比色测定。以蛋白含量(μg) 为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线;

5. 稀释待测样品至合适浓度,使样品稀释液总体积为 20μL,加入 BCA 工作液 200μL,充分混匀,37 ℃放置 30 分钟后,以标准曲线 0 号管做参比,在 562nm 波长下比色,记录吸光值; 6. B. 分光光度计测定 1. 标准曲线的绘制:各管按照下表加入试剂 孔号 蛋白标准溶液(μL) 去离子水(μL) 对应蛋白含量(μg) 2. 3. 0 0 100 0 1 5 95 2.5 2 10 90 5.0 3 20 80 10.0 4 40 60 20.0 5 60 40 30.0 6 80 20 40.0 7 100 0 50.0 根据所测样品的吸光值,在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量(μg) ,除以样品稀释液总体积(20 μL) ,乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度(单位:μg/μL) 。

根据样品数量,按 50 体积 BCA 试剂 A 加 1 体积 BCA 试剂 B(50:1)配制适量 BCA 工作液,充分 混匀; 各管加入 1000μL BCA 工作液;

4. 5. 6.

各管充分混匀,37℃放置 30 分钟,然后在 562nm 下比色测定。以蛋白含量(μg)为横坐标,吸光 值为纵坐标,绘出标准曲线; 稀释待测样品至合适浓度,样品稀释液总体积为 100μL,加入 BCA 工作液 1000μL,充分混匀,37 ℃放置 30 分钟后,以标准曲线 0 号管做参比,在 562nm 波长下比色,记录吸光值; 根据所测样品的吸光值, 在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量 (μg) 除以样品稀释液总体积 , (100 μL) ,乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度(单位:μg/μL) 。

四、 注意事项 1. 2. 配制好的混合 BCA 工作液室温 24 小时内稳定。 加入 BCA 工作液后,也可以在室温放置 2 小时,或 60℃放置 30 分钟。BCA 法测定蛋白浓度时,吸

光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低,适合在较高温度 孵育,或延长孵育时间。 3. 待测样品浓度在 50~2000 微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。 4. BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中高达 5%的 SDS,5% 的 Triton X-100, 5%的 Tween 20, 60, 80。 但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响, 需确保 EDTA 低于 10mM, 无 EGTA,二硫苏糖醇低于 1mM,β-巯基乙醇低于 1mM.不适用 BCA 法时建议使用 Bradford 蛋白浓度测 定试剂盒。 5. 操作时要带手套。 五、 凯基相关产品 (详见凯基网站 http://www.keygentec.com.cn) 1、 蛋白提取 核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒 全蛋白提取试剂盒 膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒 线粒体蛋白提取试剂盒 磷酸化蛋白提取试剂盒(简易型) 2、 蛋白定量 BCA 法蛋白定量检测试剂盒 Bradford 法蛋白定量检测试剂盒 Lowry 法蛋白定量检测试剂盒 3、 蛋白染色 蛋白质银染检测试剂盒 蛋白质考马斯亮蓝染色检测试剂盒 考马斯亮蓝蛋白快速染液 4、 蛋白分子量 Marker 蛋白分子量 Marker(14KD-116KD) 蛋白分子量 Marker(10KD-200KD) 预染蛋白分子量 Marker(20KD-118KD) 预染彩色蛋白分子量 Marker(11KD-250KD) 5、 Western bloting 组装试剂盒 凯基蛋白提取和 SDS-PAGE 凝胶电泳试剂盒 凯基 Western bloting 检测试剂盒 6、 Western bloting 化学发光试剂盒 ECL 检测试剂盒 加强型 ECL 检测试剂盒


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