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POD测定方法


POD 的测定
※<实验材料、试剂与仪器设备>
1、实验仪器 722 型分光光度计、离心机、秒表、电子天平、研钵 2、 实验试剂 愈创木酚、 30%过氧化氢、 20mmol/LKH2PO4、 100mmol/L 磷酸缓冲液(pH6.0)、反应混合液[100mmol/L 磷酸缓冲液(pH6.0)50mL, 加入愈创木酚 28uL,加热搅拌,直至愈创木酚溶解,待溶液冷却后,加 入 30%过氧化氢 19uL,混合均匀保存于冰箱中]

※<实验步骤>
1、粗酶液的提取 称取植物(小麦叶片)材料 0.1g,加 20mmol/LKH2PO4 5mL,于研钵中研磨成匀浆,以 10000r/min 离心 10 分 钟,收集上清液保存在冷处,所得残渣再用 20mmol/LKH2PO45mL 溶液提 取一次,全并两次上清液。 2、酶活性的测定 取比色皿 2 只,于一只中加入反应混合液 3mL, KH2PO41mL,作为校零对照,另一只中加入反应混合液 3mL,上述酶液 1mL(如酶活性过高可适当稀释),立即开启秒表,于分光光度计 470nm 波长下测量 OD 值,每隔 30s 读数一次。以每分钟表示酶活性大小,即以 △OD470/min.mg 蛋白质表示,蛋白质含量测定按 Folin 法进行。

5 ※<结果计算>
以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小,即以 Δ A470/[min.g(鲜 重)]表示之。也可以用每 min 内 A470 变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性 单位(u)表示。

过氧化物酶活性[u/(g.min)]=
式中:Δ A470——反应时间内吸光度的变化。 W——植物鲜重,g。

VT ——提取酶液总体积,mL。Vs ——测定时取用酶液体积 ,mL。 t——反应时间,min。


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